وسترن بلات (WESTERN BLOT) چیست؟

وسترن بلات (western blot) چیست؟

وسترن بلات (که بعضاً به آن ایمونوبلوت پروتئین گفته می شود) یک روش آزمایشگاهی است که برای تشخیص مولکولهای خاص پروتئین از میان مخلوطی از پروتئین ها استفاده می شود که به طور گسترده در زیست شناسی مولکولی و ایمنی زایی مورد استفاده قرار می گیرد. این مخلوط می تواند شامل تمام پروتئین های مرتبط با یک بافت یا نوع سلول خاص باشد. از وسترن بلات نیز می توان برای ارزیابی اندازه پروتئین مورد نظر و برای اندازه گیری میزان بیان پروتئین استفاده کرد.

اولین قدم در وسترن بلات آماده سازی نمونه پروتئین با مخلوط کردن آن با مواد شوینده ای به نام سدیم دودسیل سولفات است که باعث می شود پروتئین ها در زنجیره ها و پالت های خطی و سپس با بار منفی باز شوند. در مرحله بعد ، مولکول های پروتئین با توجه به اندازه آنها با استفاده از روشی به نام الکتروفورز ژل از هم جدا می شوند. پس از جداسازی ، پروتئین ها از ژل روی یک غشای بلات منتقل می شوند. اگرچه این مرحله همان چیزی است که به تکنیک نام “وسترن بلات” می دهد ، اما معمولاً این اصطلاح برای توصیف کل روش استفاده می شود.

پس از اتمام انتقال ، غشاء همه باند های پروتئینی را در اصل روی ژل قرار می دهد . در مرحله بعد ، غشا وارد مرحله ای به نام مسدود کردن می شود که از بروز هرگونه واکنش غیر اختصاصی جلوگیری می کند. سپس غشایی با آنتی بادی به نام آنتی بادی اولیه انکوبه می شود که به طور خاص به پروتئین مورد نظر متصل می شود . پس از انکوباسیون، هر آنتی بادی اولیه نامحدود شسته می شود ، و غشا دوباره انکوبه می شود ، اما این بار با یک آنتی بادی ثانویه که به طور خاص با آنتی بادی اولیه شناخته و متصل می شود. آنتی بادی ثانویه به یک آنزیم گزارشگر که رنگ یا نور تولید می کند ، مرتبط می شود و به راحتی امکان شناسایی و تصویربرداری از آن فراهم می شود. این مراحل باعث می شود پروتئین خاصی از میان مخلوطی از پروتئین ها شناسایی شود.

کاربرد ها

وسترن بلات (western blot) به طور گسترده در بیوشیمی برای تشخیص کیفی پروتئین های منفرد و اصلاح پروتئین ها (مانند تغییرات پس از ترجمه) مورد استفاده قرار می گیرد. تخمین زده می شود حداقل 8-9٪ از کل انتشارات مربوط به پروتئین دارای تکنیک وسترن بلات باشد. این به عنوان یک روش کلی برای شناسایی حضور یک پروتئین منفرد خاص در مخلوط پیچیده پروتئین ها استفاده می شود. یک تخمین نیمه کمی از یک پروتئین می تواند از اندازه و شدت رنگ یک باند پروتئین در غشای لکه حاصل شود. علاوه بر این ، با استفاده از یک سری رقیق سازی پروتئین خالص از غلظت های شناخته شده می توان مورد استفاده قرار گرفت تا تخمین دقیق تری از غلظت پروتئین فراهم شود. وسترن بلات به طور معمول برای تأیید تولید پروتئین پس از کلونینگ استفاده می شود . همچنین در تشخیص پزشکی ، به عنوان مثال ، در آزمایش HIV یا تست BSE استفاده می شود. برای تأیید تولید پروتئین پس از کلونینگ استفاده می شود. همچنین در تشخیص پزشکی ، به عنوان مثال ، در آزمایش HIV یا تست BSE استفاده می شود.

آزمایش تأییدکننده HIV توسط وسترن بلات (western blot) برای تشخیص آنتی بادی ضد HIV در نمونه سرم انسانی استفاده می کند. پروتئین های شناخته شده از سلول های آلوده به HIV بر روی غشایی جدا می شوند.

از وسترن بلات همچنین به عنوان آزمایش قطعی برای بیماری Creutzfeldt-Jakob Disease استفاده می شود که نوعی بیماری پریون مربوط به مصرف گوشت گاو آلوده با آنسفالوپاتی اسفنجی گاوی است.

کاربرد دیگر در تشخیص تولارمی (tularemia) است. ارزیابی توانایی وسترن بلات در تشخیص آنتی بادی F. tularensis نشان داد که حساسیت آن تقریباً 100٪ است.

برخی از انواع آزمایش بیماری لایم (Lyme) از وسترن بلات استفاده می کنند. از وسترن بلات همچنین می توان به عنوان یک آزمایش تأیید کننده برای عفونت هپاتیت B و عفونت HSV-2 (تبخال نوع 2) استفاده کرد.

کاربردهای بیشتر تکنیک وسترن بلات شامل کاربرد آن توسط آژانس جهانی مبارزه با دوپینگ (WADA) است.